慢性肾病微炎症大鼠肠源性外泌体携带miR-146a表达特性研究
2023.06.09目的 研究慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)微炎症大鼠肠源性外泌体携带 miR-146a 的表达 特性。
方法 健康 SPF 级 Wistar 雄性大鼠 16 只,随机分为 2 组,分别为正常组、模型组。 采用腺嘌呤诱导 CKD 大 鼠模型。 适应性喂养 3 d 后,大鼠灌胃腺嘌呤(冲击量 220 mg / (kg·d),4 周;维持量 100 mg / kg,3 周,共 7 周)。 实 验终点,大鼠经麻醉后,腹中动脉取血,留取血清和 EDTA 抗凝血浆各一份。 测定血清中的尿素氮(BUN)、肌酐 (Cr);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)含量; 制备肾组织病理切片,苏木-伊红染色(HE)观察肾组织形态,马松(Masson)染色观察肾纤维化程度;透射电镜观察 肠组织超微结构和外泌体分泌情况;试剂盒法提取血浆外泌体,超高速离心法提取肠道组织中外泌体;负染电镜技 术鉴定外泌体形态;NTA 技术测定外泌体粒径;免疫蛋白印迹法(Western blot)测定外泌体表面生物标记物;反转录 聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测血浆外泌体中携带的微小 RNA-146a(miR-146a)表达水平;Western blot 法测定肠 道组织肿瘤坏死因子受体相关因子 6( tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)、核因子-κB( nuclear factor-κB signalling pathway,NF-κB)、Toll 样受体 4(TLR4)炎性信号通路蛋白表达。
结果 与正常组比较,模型组灌 胃腺嘌呤 7 周后,构建 CKD 大鼠模型,模型大鼠的血清 BUN、Cr 水平显著增加(P<0. 01)。 模型组血清和回肠组织 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平明显高于正常组(P<0. 01)。 模型组肾病理显示肾小管明显萎缩、扩张,部分呈囊性病变, 肾小管内大量褐色结晶,可见管型和再生;肾小球硬化,肾小球萎缩,鲍曼氏囊腔扩张,数目明显减少并大小不一; 间质纤维化及炎性细胞浸润明显。 模型组大鼠血浆和肠道组织中均可见粒径在 155 nm 的外泌体,透射电镜可见 模型组大鼠的肠道组织释放出大量外泌体。 模型组血浆外泌体携带 miR-146a 的表达显著高于正常组(P<0. 01), 而肠道组织外泌体携带 miR-146a 的表达却显著低于正常组(P<0. 01)。
结论 腺嘌呤导致大鼠肾功能损伤,肾组 织形成病理性改变,伴发全身微炎症。 同时,CKD 大鼠肠道组织分泌并释放外泌体,使血浆中外泌体携带 miR-146a 被激活增加。
