miR-141基因干扰靶向PTEN影响小鼠BMSCs成骨分化的实验研究
2023.06.09目的 探讨微小核糖核酸-141(micro-RNA-141,miR-141) 基因干扰靶向蛋白酪氨酸磷酸酶基因 (PTEN)对小鼠骨髓间充质干细胞( bone mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响。
方法 取小鼠 BMSCs 并鉴定;构建 miR-141 mimics、 miR-141 inhibitor、 miR-141 mimics-NC、 miR-141 inhibitor-NC 质粒,分别转染小鼠 BMSCs,并记为过表达组、沉默组、过表达对照组、沉默对照组,另取小鼠 BMSCs 常规培养记为空白对照组。 碱性磷 酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、茜素红染色检测各组成骨分化能力;检测各组 miR-141、PTEN 通路相关基因 及蛋白表达;验证 miR-141 是否可靶向调控 PTEN。
结果 与空白对照组、过表达对照组相比,过表达组 ALP 定量, AKT、GSK3β mRNA 及蛋白表达,Runx2、Osterix 蛋白表达,p-AKT、p-GSK3β 均下降(P<0. 05),钙化结节大小、数量、 密度均显著减少,miR-141 mRNA 表达及 PTEN mRNA 和蛋白表达均升高(P<0. 05);与空白对照组、沉默对照组相 比,沉默组 ALP 定量,AKT、GSK3β mRNA 及蛋白表达,Runx2、Osterix 蛋白表达,p-AKT、p-GSK3β 均升高(P<0. 05), 钙化结节也显著增多,miR-141 mRNA 表达及 PTEN mRNA 和蛋白表达低于其余 4 组(P<0. 05);荧光素酶活性实验 验证 miR-141 可靶向调控 PTEN。
结论 miR-141 过表达可激活 PTEN 信号通路抑制小鼠 BMSCs 成骨分化,而 miR- 141 基因沉默可下调 PTEN,上调 AKT、GSK3β 表达,增加 p-AKT、p-GSK3β 水平,并促进成骨标志蛋白表达,促进小 鼠 BMSCs 成骨分化。
