荧光RAA检测小鼠微小病毒的研究和应用
2023.06.07目的 病毒培养、组织学、免疫学及普通 PCR 方法等在小鼠微小病毒(minute virus of mice,MVM)的 检测方面都存在一定的不足,不能满足目前实验动物饲养机构现场检测 MVM 病毒的需要,因此探索开发一种新 的、简单易用,便于现场检测 MVM 的检测方法具有重要的意义。
方法 根据 Genbank 公布的 MVM 序列,对 MVM 高度保守序列区域 Ns1 基因设计荧光重组酶介导链替换核酸扩增的引物和探针,建立了一种 MVM 荧光法重组酶 介导链替换核酸扩增技术(Real-time RAA)检测方法,对其特异性、室温储存稳定性、灵敏度及临床样本验证方面与 qPCR 法进行对比分析。
结果 荧光 RAA 法在 39℃ 20 min 内即可检测到 MVM 病毒特异性扩增曲线;其灵敏度为 10 copies/ μL;与 Reo-3、MHV-1、MHV-3、MHV-A59、MHV-JHM 病毒均无交叉反应;检测试剂室温储存 20 d 无明显的 扩增性能下降;分别对 15 份阳性模拟样品进行荧光 RAA 法与 qPCR 法的检测比对,结果显示两种方法的符合率为 15 / 15;对两种方法的相关性进行统计学分析,结果显示相关系数 R 2 = 0. 85,两种方法具有显著的线性相关性。
结论 本研究建立的 MVM 荧光 RAA 法,操作简单,特异性强、灵敏度高,能够快速有效地检出临床样本。
