目的 建立 miR-100 基因敲除小鼠模型,初步探索 miR-100 基因缺失对小鼠造血系统发育的影响。

方法 通过将 EIIa-Cre ^- ;miR-100 ^{fl/ fl} 小鼠和 EIIa-Cre ⁺ ;miR-100 ^{+ / +}小鼠进行配繁,培育出 EIIa-Cre ⁺ ;miR-100 fl/ fl (miR- 100 ^{- / -} )小鼠,也就是 miR-100 全身敲除小鼠。 通过 PCR 技术以及 q-PCR 技术鉴定小鼠基因型并验证 miR-100 基因 在小鼠骨髓和脾的敲除效率。 分离小鼠外周血、骨髓、脾,制备单细胞悬液,利用血细胞计数、流式细胞术、甲基纤 维素血细胞集落形成实验分析该基因缺失对小鼠造血系统的影响。 并通过 q-PCR 和 RNA 结合蛋白免疫沉淀实验 (RIP)验证 miR-100 与 Mospd2 之间的关系。

结果 PCR 和 q-PCR 结果表明,成功构建 miR-100 基因敲除小鼠。 血 细胞计数、流式细胞术及甲基纤维素血细胞集落形成实验结果表明,miR-100 基因缺失小鼠外周血髓系细胞比例增 多,但其对小鼠骨髓和脾的髓系细胞,T/ B 淋巴细胞、红细胞的比例和绝对细胞计数无影响,并且 miR-100 基因缺失 对小鼠骨髓造血干祖细胞群体比例和数量及骨髓单个核细胞集落形成能力无影响。 q-PCR 结果表明,miR-100 缺 失可以促进小鼠骨髓细胞中 Mospd2 的表达。 RIP 实验表明,miR-100 以 AGO2 蛋白复合物的形式与 Mospd2 结合在 一起,进而调控 Mospd2 的表达。

结论 本研究成功建立了 miR-100 基因敲除小鼠模型,发现该基因缺失影响小鼠 外周血髓系细胞占比,验证了 miR-100 与 Mospd2 之间的关系。 本研究为进一步了解该基因在小鼠造血调控中的作 用提供指导。

阅读原文：MiR-100基因敲除小鼠的建立及造血表型初步分析.pdf