黄芩素对TBHP诱导小鼠髓核细胞衰老的保护作用
2023.05.31目的 研究黄芩素(Baicalein,BAI)对叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导的小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的影响。
方法 取8周龄小鼠，体外分离培养髓核细胞，传代至P2~P3代。将实验分为对照组、模型组及黄芩素组3组。B半乳糖苷酶染色检测髓核细胞衰老变化。实时荧光定量PCR(Real--time quantitative PCR,RT-qPCR)检测聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-.3,MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、肿瘤坏死因子a(tumor necrosis factor-.a,TNF-a)、白细胞介素-lB(L-lB),p53,pl6mRNA表达。免疫荧光法(immunofluorescence,IF)检测TNF-a表达水平。免疫印迹试验(Western blot)检测白细胞介素-6(IL-6)、aggrecan,p53、pl6、L-lB、TNF-a蛋白表达。
结果 TBHP最佳干预浓度为100umo/L,干预时间4h:黄芩素最佳干预浓度为1.0ug/mL,干预时间为24h。与对照组比较，模型组B半乳糖染色阳性率较对照组显著升高(P<0.05),p53、pl6、IL-lB、TNF-a mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),MMP-3mRNA表达显著升高(P<0.O5),MMP-9mRNA表达升高，差异无统计学意义(P>0.05),aggrecan mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),collagenⅡmRNA表达降低，差异无统计学意义(P>0.05),L-6蛋白表达升高，差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较，黄芩素组B半乳糖染色阳性率较模型组明显降低(P<0.05),p53、pl6、IL-lB、TNF-a mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),MMP-3、MMP-9mRNA表达显著降低(P<0.05),aggrecan mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),collagenⅡmRNA表达显著升高(P<0.05),L-6蛋白表达显著降低(P<0.O5)。
结论 黄芩素能延缓TBHP诱导的小鼠髓核细胞衰老的进程。
